蜂疗网如何进行昆虫病毒的培养
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1950年代以前，病毒的培养都限于实验动物的接种，昆虫病毒也一样，限于实验昆虫的接种。动物接种增殖病毒，研究的局限性很大。1950年代以来，把组织培养技术用于病毒的培养与研究，大大推动了病毒学的发展。
1.基本操作术
（1）组织的剖取
虫体先进行体表消毒，常用0.5％的升汞浸泡40分钟，然后用无菌水冲洗3次，用无菌纱布吸干。剖取卵巢、睾丸、肌肉、气管、丝腺、食道、中肠、皮肤等组织，用无菌水洗净，置平板剪碎成0.1～0.2mm见方的小块，用培养液洗涤，离心后待用。
（2）组织的培养
可采用不同的培养方法，如盖片悬滴培养、试管培养及单层细胞培养，根据研究所需而定。
单层细胞培养的方法为：先将小组织块制成单细胞悬浮液，用血球计数板计数后，加培养液，配成细胞数为6×10的六次方/毫升的悬浮液，于每个克氏瓶中注入细胞数为12×10的六次方/毫升的悬液0.5毫升，再加2.5毫升培养基，加塞后，于26～27℃培养。上述悬液也可培养于平板或盖片上。平板中注入细胞数12×10的5次方/毫升的悬液1毫升，加培养基10毫升；盖片上则加细胞悬液与培养液各一滴。
2.接种
病虫组织或组织提取物，提纯的病毒，病毒核酸，病虫血清及病毒感染组织培养的无细胞培养基部可用于接种，后两种方法最常用。
（1）病虫血清接种用于接种病毒的都是48小时的细胞培养物。除去培养基，再用新鲜培养基洗涤2次。接种病毒量是稀释100倍的病虫血清（病虫血液2000 r/分钟，离心5分钟，取上清液证实无细胞存在），平板中可加0.5毫升，克氏瓶中加0.2毫升，盖片则加一滴。再于平板中加培养基4.5毫升，克氏版1.5毫升，盖片加一滴。26～27℃培养，同时作对照区。
（2）组织培养基接种用含游离病毒粒子的组织培养基接种培养细胞，或用蔗糖密度梯度法提纯感染细胞培养基中的病毒用于接种。
3.影响病毒培养的条件
（1）温度与虫体感染一样，培养温度也可以影响病毒的发育。一般以25～28℃为宜，因为在这个温度下，大多数昆虫组织细胞生长最好。
（2）培养基营养条件对昆虫病毒在体外增殖有明显影响。因为培养基直接影响了细胞的生长及细胞的生理生化，从而影响了病毒在细胞内的增殖。
（3）细胞的感受性不同的细胞系之间对病毒的感受性不同，病毒的发育差别显著，混合的细胞群体与细胞纯系之间感受性也有明显差异。而一个细胞系的几个细胞纯系之间也存在着感受性的差别。
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本文来源：39蜂疗网 ( 编辑：苍冥)
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