美洲幼虫腐臭病的诊断与血清反应

2024年07月02日已有人阅读病友分享我想学蜂疗

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对美洲幼虫腐臭病和欧洲幼虫腐臭病的诊断：

先进行标准抗原的制备。先将已经分离纯化的美洲和欧洲幼虫腐臭病的病原细菌、烘干至恒重，粉碎，然后再按1:100的比例加生理盐水，制成悬浮液，并在低温下，静置一昼夜。用石棉漏斗抽滤，将滤液分装于安培瓶内、灭菌后，保存于冰箱内。

再进行抗体的制备。采用兔免疫血清，用已制备好的标准抗原、每隔5日注射1次，注射剂量按第一次0.25毫升，第二次0.5毫升，第三次1.0毫升、第四次2.0毫升，依次增加，注射完毕后经过7日，即可采血，进行效价测定，若效价不高时，还可增量注射菌液1～2次，至试血合格后，即可进行放血。

接下来就可以进行诊断。对美洲幼虫腐臭病的诊断，目前主要是采用试管沉淀反应和点滴凝集反应等方法进行；对欧洲幼虫腐臭病的诊断，则主要是采用试管沉淀反应进行。在具体方法上，一般都是用预先制备的已知的抗体血清去检查未知的抗原（即幼虫尸体提取液）。若发生沉淀或凝集，即可诊断为阳性。

试管沉淀反应

第一步，制备未知抗原（病幼虫提取液）。取患病幼虫10头，放在研钵内研碎，加入生理盐水7～15毫升，制成悬浮液，置水浴锅内煮沸，15分钟然后用石棉滤器过滤，取滤液供检验用。

第二步，进行沉淀反应。取直径为0.4～5毫米，高5～7厘米的小试管，先取0.3～0.4毫升的标准抗体血清，放在试管的底部，铺呈一薄层。然后用移液管，吸取大约相等数量的未知抗原（病蜂提取液），小心地加入试管内，均匀地铺在抗血清上面成一薄层。在室温条件下反应15分钟。若在0.5～2分钟后，在血清和提取物的界面下，出现薄而均匀的浅蓝色的混浊环，即为阳性反应。若经过15分钟，在血清提取物的界面上仍是透明的，即为阴性反应。

点滴凝集反应

第一步，制备未知抗原（病幼虫提取液）。取新死亡幼虫尸体10头，放在瓷研钵内研碎，加生理溶液10m1，制成悬浮液，然后用棉花过滤，并在2500r/分钟下离心10～15分钟，再将上清液倾去，残渣供作试验抗原用。

第二步，在无菌玻片上，用移液管分别滴加稀释度各为1：200和1：400的标准抗血清，然后再分别滴加试验抗原。若在3～5分钟内，澄清液中出现凝集成团的絮片，即为阳性反应。